PCR(+GDNA雨刷)的Hisscriptⅲrt Supermix是GPCR(+GDNA雨刷)的HisscriptⅱQ rt Supermix的改进版本,包括Hisscriptⅲ逆转录酶,这是一种具有优化缓冲液的新型逆转录酶。该套件提高了DNA合成的效率,非常适合两步QRT-PCR检测。

试剂盒中的4 x DNA雨刮器混合物完全消除了RNA模板中的残留基因组DNA,从而提供了更可靠的定量结果。它消除了跨内含子设计底漆的需求,从而简化了PCR引物设计。

5 X HisscriptⅲQRT SuperMix由逆转录反应所需的所有组件组成,并且可以通过添加模板RNA和无RNaseDDH₂O来快速启动。GDNA雨刮器被终止,因此cDNA的完整性不受影响。它与基于探针和基于染料的QPCR兼容,允许高性能基因表达分析。

产品优势

  • 简单快捷的操作:5×Hisscript®III QRT SuperMix包括逆转录所需的所有组件。通过添加模板RNA,可以在20分钟内完成逆转录反应
  • 广泛的模板兼容性:与完整性差的不同种类的RNA模板的兼容性
  • 杂质的高耐受性:对于逆转录,该产物对常见杂质(例如异丙醇,乙醇,腐殖能,鸟胺异硫氰酸盐,水平平衡苯酚等)具有很强的耐受性。
  • 提高了逆转录效率:​​与常见的逆转录产品相比,®QPCR(+GDNA雨刮器)的III RT SUPERMIX逆转cDNA的最小定量CT值,并且具有更好的逆转录效率

申请

该产品适用于植物,动物和微生物RNA的逆转录。这些产品与基于探针和基于染料的QPCR兼容。

自准备的材料

  • 无RNase离心管(1.5 mL),无RNase Tip,无RNase PCR管(0.2 mL)
  • PCR仪器,移液器,冰或冰箱

RNA

需要高质量的RNA来获得高质量的cDNA。在实验之前,用户必须通过电泳验证RNA完整性。

QPCR试剂选择指南

第一股cDNA产物可以直接用作GPCR的模板。对于PCR,建议模板cDNA产物的体积不得超过QPCR反应总体积的1/10。Chamq Universal SYBR QPCR Master Mix(Vazyme#Q711)或ACEQ Universal U探针Master Mix V2(Vazyme#Q513)可以选择为QPCR试剂。

笔记

  • 4×GDNA雨刮器混合物,5×无RT对照混合物和5×Hiscripti QRT SuperMix具有高浓度的甘油。用户应短暂地离心并上下移动以便在使用前充分混合。
  • 将不超过1 g的总RNA添加到20 L逆转录反应系统中。如果靶基因的表达水平较低,则总RNA的量最高可达5 g。否则,添加的RNA量太高,可能超过后续qPCR的线性范围。
  • cDNA产物可用于QPCR反应,而不是用于对下游实验(例如克隆)的长碎片PCR扩增。如有必要,可以使用Hisscript IL第一股cDNA合成试剂盒(+gdna雨刮器)(vazyme#r312)。
  • 可以用5×Hisscript I QRT SuperMix立即进行逆转录,从而避免了基因组去除步骤。但是,不应与没有基因组去除模块的试剂一起使用4×gDNA雨刮器混合物,因为没有后者的套件中的混合物不包含终止GDNA刮水器反应的组件。这可能会影响随后的GPCR结果。
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